廣州熱線(xiàn)

　　摘要：在《Human Gene Therapy》發(fā)表的一篇文章中，實(shí)驗(yàn)者用GDS-80低壓基因槍在30psi的可耐受壓力下進(jìn)行三次轟擊可以產(chǎn)生與在更高壓力下進(jìn)行一次轟擊相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)染效率，這通常會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的肝臟撕裂傷?？傊?，用金DNA基因槍轟擊肝臟是HBT轉(zhuǎn)染淺表肝細(xì)胞的一個(gè)潛在的有用的替代方法，特別是因?yàn)樗粫?huì)引起嚴(yán)重的肝損傷。

　　雖然體內(nèi)非病毒基因的投遞對(duì)肝基因治療至關(guān)重要，但仍存在許多技術(shù)障礙。將編碼DNA的增強(qiáng)綠色熒光蛋白(EGFP)包覆在金顆粒(金-DNA)上，溶解于磷酸鹽緩沖鹽(純DNA)，并作為聚合物佐劑(jetPEI)-半乳糖苷酶溶液(聚合物-DNA)制備。采用非病毒方法進(jìn)行小鼠肝轉(zhuǎn)染，包括基于流體動(dòng)力學(xué)的純DNA轉(zhuǎn)染(HBT)、聚合物DNA的轉(zhuǎn)運(yùn)和肝內(nèi)注射、純DNA、金DNA和聚合物DNA的基因槍轟擊。只有HBT和基因槍轟擊產(chǎn)生大量EGFP肝細(xì)胞。在優(yōu)化的條件下，HBT除肝邊緣外，其全肝轉(zhuǎn)染率為20%。HBT導(dǎo)致明顯的肝梗塞，最突出的是肝邊緣。EGFP肝細(xì)胞主要位于淺層。

　　HBT和基因槍轟擊均能有效地轉(zhuǎn)染小鼠肝細(xì)胞。重型肝梗塞阻礙HBT后肝細(xì)胞外基因表達(dá)。在30 psi的條件下，用加速粒子基因槍反復(fù)轟擊金-DNA，是HBT在體內(nèi)向淺表肝細(xì)胞傳遞基因的潛在替代品。

　　在《Human Gene Therapy》發(fā)表的一篇文章中，研究人員用增強(qiáng)的綠色熒光蛋白編碼 DNA 進(jìn)行低壓基因槍轟擊檢查小鼠肝臟轉(zhuǎn)染的有效性，并將結(jié)果與其他化學(xué)或物理方法獲得的結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果表明，低壓手持式基因槍僅通過(guò) 20-45 psi 的壓力，即可將金 DNA 轟擊到小鼠肝臟中。

　　實(shí)驗(yàn)中，為了確定CTGF與E7 DNA疫苗連接后是否能增強(qiáng)小鼠E7特異性T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，研究人員用流式細(xì)胞術(shù)分析了E7特異性CD4+和CD8+T細(xì)胞前體的細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色。結(jié)果證實(shí)了接種與E7相關(guān)的編碼CTGF的DNA可顯著增強(qiáng)E7特異性T細(xì)胞免疫。

　　為了確定E7特異性CD8+T細(xì)胞反應(yīng)的增強(qiáng)是否轉(zhuǎn)化為E7特異性抗腫瘤保護(hù)作用，研究人員進(jìn)行了體內(nèi)腫瘤保護(hù)實(shí)驗(yàn)，證實(shí)了接種CTGF/E7 DNA 增強(qiáng)了表達(dá)E7腫瘤細(xì)胞系的小鼠的腫瘤保護(hù)作用。

　　結(jié)果顯示，當(dāng)CTGF與DNA疫苗中的E7抗原相連時(shí)，CTGF可以保護(hù)接種的小鼠免受表達(dá)E7的腫瘤細(xì)胞的致命攻擊。

　　實(shí)驗(yàn)中研究人員發(fā)現(xiàn)，用GDS-80低壓基因槍在30psi的可耐受壓力下進(jìn)行三次轟擊可以產(chǎn)生與在更高壓力下進(jìn)行一次轟擊相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)染效率，這通常會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的肝臟撕裂傷?？傊?，用金DNA基因槍轟擊肝臟是HBT轉(zhuǎn)染淺表肝細(xì)胞的一個(gè)潛在的有用的替代方法，特別是因?yàn)樗粫?huì)引起嚴(yán)重的肝損傷。

　　在本研究中，實(shí)驗(yàn)人員證明了將HPV16 E7抗原與CTGF DNA連接可顯著提高表達(dá)E7的DNA疫苗的效力。

　　實(shí)驗(yàn)中，研究人員在接種后1天或5天取小鼠腹股溝淋巴結(jié)，用PE結(jié)合抗CD11c抗體流式細(xì)胞儀分析了CD11c+細(xì)胞百分率，接種小鼠并收集了富含CD11c+的細(xì)胞。

　　[1] Gene Gun Bombardment with DNA-Coated Gold Particles Is a Potential Alternative to Hydrodynamics-Based Transfection for Delivering Genes into Superficial Hepatocytes[J]. Human Gene Therapy, 2008, 19(4):391.